3. the characterization of bacterial types. Learn how manage the disease causes bacteria colony isolates on different types of fuel breeding food for use in the characterization of the fuel used by a test meal consisting of a meal, including common bacterial yeast extract agar NA dextrose-calcium carbonate (YDC) and semi-specific adjustments for selection of bacteria that is causing the disease is 5% Nacl + antibiotic + KB (cycloheximide) (Office of the national agricultural commodity and food standards, 2551 (2008)) and preliminary study of biochemical properties by standard methods such as soft rot formation, Levan, gelatin, potato starch, urease, motility, citrate utilization, lipolytic activity, and carbon utilization, etc., on the basis of Bergey Manual of Determinative Bacteriology textbook, 10th ed. In order to resolve racial type. 4. to identify the type of bacteria by nucleotide sequence analysis (DNA Sequence) นำเชื้อแบคทีเรียแกรมลบที่ชักนำการเกิดปฏิกิริยาการตอบสนองอย่างเฉียบพลันบนใบยาสูบและก่อโรคบนใบข้าวโพดข้างต้น นำมาจำแนกโดยการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ ด้วยวิธี DNA sequences โดยใช้ universal primer 6F (GGAGAGTTAGATCTTGGCTCAG) และ 1510R (GTGCTGCAGGGTTACCTT GTTACGACT) (van der Meer et.al,1998)16s rDNA ของเชื้อแบคทีเรียสาเหตุโรคพืช (Proteobacteria) โดยทำปฏิกิริยาในปริมาตรรวม 25 ไมโครลิตร (ดีเอ็นเอ 25 ng ,dNTPs 1 mM ,Taq DNA polymerase enzyme 1 unit ,MgCl2 2.5 mM ,ไพรเมอร์ (6F และ 1510R) 1 µM ,10X PCR buffer 2.5 µl และนํ้ากลั่นนึ่งฆ่าเชื้อ) กำหนดปฏิกิริยา PCR โดยใช้ Predenaturation ที่ 95 oc (5 นาที) denaturing 95 oc เป็นเวลา (1 นาที) annealing 56 oc (1 นาที) และ extension 72 oc (1 นาที) จํานวน 30 รอบ นำ PCR product ที่ได้ตรวจดูภายใต้แสง UV transilluminators ที่ความยาวคลื่น 312 นาโนเมตร พร้อมทำการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ ด้วยวิธี Sequence analysis (Biodesign) นำข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ได้มาวิเคราะห์เปรียบเทียบกับนิวคลีโอไทด์ในฐานข้อมูล Genbank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)โดยโปรแกรม BLAST และ Alignment ClustalX เพื่อจำแนกหาความใกล้ชิดของเชื้อเป้าหมาย
การแปล กรุณารอสักครู่..