1. เคลือบเพลทด้วยซีรัมกระต่ายที่มีแ

1. เคลือบเพลทด้วยซีรัมกระต่ายที่มีแอนติบอดีต่อเชื้อไวรัส FMD (rabbit trapping antibody) ไทป์ที่ ต้องการตรวจ และซีรัมกระต่ายปกติ (normal rabbit serum) ซึ่งปรับความเข้มข้นแล้ว (working dilution) ท าการเจือจางโดยใช้ coating buffer (0.05 M carbonate bicarbonate buffer pH 9.5) หยดลง บน ELISA plate ก้นเรียบหลุมละ 50 µ l วางบนเครื่องเขย่าแนวราบ (orbital shaker) ใช้ความเร็ว 200 รอบต่อนาที ในตู้อบอุณหภูมิ 37oC นาน 60 min หรือเก็บข้ามคืนที่ 4oC
2. ล้างเพลทด้วย PBS 5 ครั้ง เคาะเพลทให้แห้ง
3. เตรียมสารละลายแอนติเจนควบคุม (antigen control) และตัวอย่างจากสารละลายเจือจาง 10% (w/v) ที่ต้องการจ าแนกไทป์ของไวรัสในไมโครทิวป์ (microtube) โดยใช้ ELISA diluent ท า two fold serial dilution ไป 3 dilution หยดลงในเพลท ปิดฝาเพลท วางบนเครื่องเขย่า ใช้ความเร็ว 200 รอบต่อนาที ในตู้อบอุณหภูมิ 37oC นาน 60 min
4. ล้างเพลทด้วย PBS 5 ครั้ง เคาะเพลทให้แห้ง
5. ใส่สารละลาย guinea pig detecting antibody ส าหรับไวรัส FMD ไทป์ที่ต้องการตรวจ และซีรัมหนู ตะเภาปกติ ซึ่งปรับความเข้มข้นเหมาะสมแล้ว โดยใช้ blocked diluent (ELISA diluent ที่มี 3% BSA เป็น ส่วนประกอบ หรือ 5 % skimmed milk) หยดลงเพลทหลุมละ 50 µ l เขย่าในตู้อบอุณหภูมิ 37oC นาน 30 min
6. ล้างเพลทด้วย PBS 5 ครั้ง เคาะเพลทให้แห้ง
7. เติมคอนจูเกต (horseradish peroxidase conjugate) ซึ่งปรับความเข้มข้นเหมาะสมแล้วใน blocked diluent หยดลงเพลทหลุมละ 50 µ l เขย่าในตู้อบอุณหภูมิ 37oC นาน 30 min
8. ล้างเพลทด้วย PBS 5 ครั้ง เคาะเพลทให้แห้ง
9. เติมสารละลายซับสเตรต TMB (tetramethylbenzidine substrate) หรือ 3,3',5,5' tetramethylbenzidine โดยใช้ TMB 1 mg ละลายด้วย phosphate citrate buffer pH 5.6 ปริมาตร 11 ml และเติม 30% H2O2 (w/v) ปริมาตร 2 µ l เขย่าให้เข้ากัน แล้วหยอดลงในเพลทหลุมละ 100 µ l ตั้งทิ้งไว้ 20 min หรือเตรียม สารละลาย 0.01% TMB หยอดลงในเพลทหลุมละ 100 ml ให้เกิดปฏิกิริยาในอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 min (10) เติม 1 N H2SO4 ปริมาตร 50 µ l เพื่อหยุดปฏิกิริยาของซับสเตรต

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 1:

1. coating plate with c-รัมก RA Tai people with antibody against FMD virus (antibody trapping rabbit) CDs that you want to check, and phenotypic รัมก specify normal (normal rabbit serum) the Tai people who adjust the intensity (working dilution) to repel the dilution buffer using a coating (0.05 M carbonate bicarbonate buffer pH 9.5) successfully drips onto ELISA plate butt hole 50 µ l lay on a rock (on orbital shaker) belonged speed 200 RPM in temperature 37oC oven 60 min at 4oC overnight. 2. wash the plate once with PBS 5 tap plate to dry.3. prepare solution worm control (antigen control), and a sample from the dilution solution 10% (w/v) that requires Java 2 Micro viruses thio's phenotypic naek (microtube) using ELISA diluent dilution to repel the two fold serial dilution 3 drops onto plate plate placed on the machine, close the lid, shake. Speed 200 RPM in temperature 37oC oven long time 60 min.4. wash the plate once with PBS 5 tap plate to dry. 5. guinea pig wearing a solution for detecting antibody to detect a virus, the FMD phenotypic and rum usually the Guinea pig the proper concentrations, using blocked diluent (ELISA diluent containing 3% 5% BSA as a component or skimmed milk) drops down plate hole 50 µ l shake in oven temperature 37oC 30 min long. 6. wash the plate once with PBS 5 tap plate to dry.7. fill the icon-(horseradish peroxidase conjugate) was the proper concentrations, diluent drops into the holes in the plate blocked 50 µ l shake in oven temperature 37oC 30 min long.8. wash the plate once with PBS 5 tap plate to dry.9. Add individual signature Deluxe PA TMB (tetramethylbenzidine substrate) or 3, 3 ', 5, 5 ' tetramethylbenzidine TMB by using phosphate citrate buffer 1 mg dissolved with pH 5.6 ml Volume 11 and 30% H2O2 (w/v) volume 2 µ l shake, then pour into a hole 100 µ l plate set left 20 min or preparation. 0.01% TMB solution drops into the plate hole per 100 ml reaction in room temperature for a period of 20 min (10) 1 N H2SO4 volume 50 µ l stop the reaction of Deluxe PA.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 2:

1. plates coated with rabbit serum that contains antibodies to the virus FMD (rabbit trapping antibody) Stipe to review and normal rabbit serum (normal rabbit serum) and then adjusting the concentration (working dilution) for the dilution using. coating buffer (0.05 M carbonate bicarbonate buffer pH 9.5) drop onto the ELISA plate butt smooth holes of 50 μ l put on a shaker horizontal (orbital shaker) speed 200 rpm in an incubator temperature of 37oC for 60 min or over. night at 4oC
2. Wash plate with PBS 5 times, knocking the plate to dry
3. Prepare a solution of antigen control (antigen control) and sample solution was diluted 10% (w / v) Preferred classifies employment daguerreotype of virus in Micro Tube (microtube) using ELISA diluent such two fold serial dilution to 3 dilution. drops into place on plate, cover plate shaker speed 200 rpm in an incubator temperature 37oC for 60 min
4. Wash plate with PBS 5 times, knocking the plate to dry
5. Put the solution guinea pig detecting antibody for the FMD virus daguerreotype to review and serum guinea pigs normally adjust the concentration properly using blocked diluent (ELISA diluent containing 3% BSA, a component or 5% skimmed milk) drops. Plate 50 μ l shake down each hole in the incubator temperature 37oC for 30 min
6. Wash plates with PBS 5 times, knocking the plate to dry
7. Fill conjugate (horseradish peroxidase conjugate), which adjusts the appropriate concentration in blocked diluent drops per plate holes 50 μ l shake the oven temperature 37oC for 30 min
8. Wash plate with PBS 5 times, tap the plate to dry
9. Adding a solution of the substrate TMB (tetramethylbenzidine substrate) or 3,3 ', 5,5' tetramethylbenzidine using TMB 1 mg dissolved in phosphate citrate buffer pH 5.6 11 ml volume and added 30% H2O2 (w / v), Volume 2. Shake well μ l Then drop into the plate wells per 100 μ l set aside 20 min or prepared solution 0.01% TMB drops into the plate wells per 100 ml reaction at room temperature for 20 min (10) added 1 N H2SO4 volume of 50 μ l. to stop the reaction of the substrate.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 3:

1. Coated plate with rabbits with serum antibody FMD (rabbit trapping antibody) type who wants to check and normal rabbit serum. (normal rabbit serum) which adjust the concentration (working dilution), to dilute the using coating buffer (0.05 M carbonate bicarbonate buffer pH 9.5) drops down on bottom hole ELISA plate smooth each 50 from L on horizontal shaking machine (orbital shaker). 200 speed rpm in oven temperature 37oC long 60 min or keep overnight 4oC
2. Wash the plate with PBS 5 times, knock plate dry
3.Solution prepared antigen control (antigen control) and samples from dilute solution 10% (w / V) that may classify the type of virus in the micro view, the pipe. (microtube) using ELISA diluent. Do two fold serial dilution to 3 dilution drop in plate and cover plate on the machine shake.200 rpm in the incubator temperature 37oC long 60 min
.4. Wash the plate with PBS 5 times, knock plate dry
5.Guinea solution with pig detecting antibody post for the virus FMD type to check and serum rat, Cochin, which adjust the normal concentration appropriate. Using blocked diluent (ELISA diluent with 3% BSA a component or 5% skimmed milk) drops into the plate holes each year 50 L.