ในเวลาสั้น ๆ loopful ของแบคทีเรียนำ

ในเวลาสั้น ๆ loopful ของแบคทีเรียนำมาล้างสองครั้งใน PBS
andresuspended ใน 500 ul extraction buffer (EB) (10 mM Tris–HCl, pH 8.0
and 1 mM EDTA) ใส่ในหลอด microcentrifuge tubes และให้ความร้อนเป็นเวลา 12 นาทีใน water bath. ในกรณีที่แช่แข็งเนื้อเยื่อของม้าม ประมาณ 500 ไมโครลิตร ของ homogenate ละลายได้โดยการนำไปปั่นระยะเวลาสั้น ๆและเม็ดเนื้อเยื่อ resuspended ใน 500 ไมโครลิตร EB การทำให้ดีเอ็นเอ บริสุทธิ์เพิ่มขึ้น โดยการสกัดฟีนอล / คลอโรฟอร์ม / isoamyl แอลกอฮอล์ตามด้วยเอทานอลการตกตะกอน จีโนม DNA ถูกวัดโดยใช้ Eppendorf spectophotometry. ประมาณ 500-1000 NG การเตรียมดีเอ็นเอถูกใช้เป็นแม่แบบในดีเอ็นเอปฏิกิริยา PCR. ซึ่ง 16S rRNA ถูกใช้เพื่อการจำแนกชนิดของดีเอ็นเอที่แยกได้ทั้งม้ามและแบคทีเรีย จาก homogenates ม้าม 3-5ไมโครลิตร ของแต่ละตัวอย่าง ดีเอ็นเอของไพรเมอร์ MarF (5'-AGGACCACGGGATTCATGTCC-3') และ Marr (5'- GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3') ใน 25 ไมโครลิตรปฏิกิริยา PCR โดยใช้โพลิเมอร์ Taq DNA แต่ละปฏิกิริยาที่มีอยู่ 1.5 หน่วยงานของเอนไซม์ 200 มิลลิเมตร triphosphate deoxynucleoside, 2 mm MgCl2 และ 10 pmol ของแต่ละไพรเมอร์ ดังต่อไปนี้: 95 ° C เป็นเวลา 5 นาที; 35 รอบ 95 ° C 55 ° C ถึง 72 ° C แต่ละเวลา 1 นาทีตามด้วยนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที ห้าไมโครลิตรของแต่ละปฏิกิริยาส่วนผสมที่ถูกวิเคราะห์บน 1.2% agarose เจลย้อมด้วย ethidium bromide สำหรับการแสดงของผลิตภัณฑ์ PCR ไม่มีแม่แบบดีเอ็นเอเชิงลบการควบคุมมาพร้อมกับการทำงานของแต่ละวิธี PCR

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 1:

Loopful of bacterial in a short time brought clear twice in PBS.Andresuspended in the extraction buffer (EB) 500 ul (10 mM Tris HCl, pH 8.0 –And 1 mM EDTA) tubes, microcentrifuge tubes put in and let heat for a period of 12 minutes in a water bath. in the case of frozen tissue of the spleen. Approximately 500 microliter of the homogenate by melt spinning leads to a short period of time, and resuspended in tissue pellet 500 EB microliter to make pure DNA extraction by phenol/chloroform/isoamyl alcohol followed by ethanol precipitation DNA genome transmission is measured using the Eppendorf spectophotometry. approximately 500-1000 NG to.Preparation of DNA is used as a template in the PCR reaction, DNA 16S rRNA which is used to distinguish the type of DNA isolated from bacteria, and the spleen the spleen homogenates of both 3-5 microliter of each DNA sample of MarF Primer (5 '-AGGACCACGGGATTCATGTCC-3 ') and Marr (5 '-GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3 ') in 25 litres micro-service interaction.Medicine PCR Taq DNA polymers using each reaction contained 200 mm 1.5 enzyme authority deoxynucleoside triphosphate, 2 mm MgCl2, and 10 pmol of each primer. As follows: 95° C for 5 min; 35° C 95° C around 55 to 72° C for 1 minute each time followed by a final extension at 72° c for 7 minutes, five of each microliter reaction mixture was analyzed on agarose gel ethidium 1.2% with layom bromide for display of product, there is no PCR template DNA negative control included with the work of each PCR method.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 2:

Briefly loopful of bacteria washed twice. PBS
Andresuspended in 500 ul extraction buffer (EB) (10 mM Tris-HCl, pH 8.0
and 1 mM EDTA) into the tube, microcentrifuge tubes and heat for 12 minutes in a water bath. In the case of frozen tissue, spleen about. 500 microliters of homogenate by melt spinning its short duration. And resuspended in 500 microliter EB granular tissue making DNA. Clean up By extracting phenol / chloroform / isoamyl alcohol, followed by ethanol precipitation genome DNA was measured using Eppendorf spectophotometry. 500-1000 NG about preparing DNA was used as template DNA in reaction PCR. 16S rRNA, which is used for the identification of DNA isolated bacteria from both the spleen and spleen homogenates 3-5 microliter of each sample. DNA primers MarF (5'-AGGACCACGGGATTCATGTCC-3 ') and Marr (5'- GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3') in a 25 microliter PCR reactions using Taq DNA polymerase Each reaction contained 1.5 units of enzyme 200mm triphosphate. deoxynucleoside, 2 mm MgCl2 and 10 pmol of each primer as follows: 95 ° C for 5 minutes; 35 around 95 ° C 55 ° C to 72 ° C, each time for one minute, followed by extension the last 72 ° C for 7 min Five microliters of each reaction mixture was analyzed on a 1.2% agarose gel stained with ethidium bromide for the show. the PCR products, DNA template negative control with the function of each method PCR.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 3:

In a short time. Loopful of bacteria was washed twice in PBS.Andresuspended in 500 UL extraction buffer (EB) (10 mM Tris - HCl pH 8.0,,And 1 mM EDTA) put in a tube microcentrifuge tubes and heated for 12 minutes in water bath. In the case of frozen tissue ของม้าม. About 500 microliter of homogenate melt spinning by the short duration and granular tissue resuspended in 500 microliter EB. The pure DNA is increased by the extraction of phenol / chloroform / isoamyl alcohol followed by ethanol precipitation DNA was measured using a genome. Eppendorf spectophotometry. About 500-1000 NG. Preparation of DNA was used as a template in the DNA reaction PCR. Which 16S rRNA is used to classification of types of DNA isolated both spleen and bacteria. From homogenates spleen 3-5 microliter of each sample DNA primers MarF (5 "- AGGACCACGGGATTCATGTCC-3") and Marr (5 ". GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3 ") in 25 microliter PCR reaction using polymer Taq DNA each existing units of the enzyme reaction 1.5 200 mm. Triphosphate deoxynucleoside 2 mm MgCl2 10 pmol, and each of the primer as follows: 95 ° C for 5 minutes; 35 around 95 ° C 55 °. C to 72 ° C each time 1 minutes followed by last name last 72 C for 7 minutes. Five of each of the reaction mixture was analyzed on the 1.2% agarose gel dyeing with ethidium bromide for display of products. PCR no template DNA negative controls with the function of each method PCR.