การจำแนกโดยการใช้เทคนิค Bio-PCR ในก

การจำแนกโดยการใช้เทคนิค Bio-PCR ในการตรวจสอบขนาดจำเพาะของยีนบริเวณ 16S-23SITS ของเชื้อ P. ananatis โดยใช้ P. ananatis pv. ananatis ไอโซเลตสับปะรด จากstock culture กลุ่มงานวิจัยอารักขาพืช กรมวิชาการเกษตร เป็นไอโซเลตเปรียบเทียบโดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะเชื้อ P. ananatis (PanITS sn2b 5’ GTCTGATAG AAAGAAAAGAAG3’และ PanITS as2b 5’ TTCATATCACCTTACCGGCGC3’) พบว่าคู่ไพรเมอร์และปฏิกิริยาดังกล่าวสามารถเพิ่มปริมาณชิ้นส่วนดีเอ็นเอของแบคทีเรียเป้าหมายได้ทุกไอโซเลต (Fig.2A) โดยมีขนาดแถบดีเอ็นเอเท่ากับ 398 bp ตามลำดับ ดังนั้นสามารถยืนยันได้ว่าแบคทีเรียดังกล่าวเป็นเชื้อ P. ananatis

4. การพัฒนาไพรเมอร์ Ygbk ให้จําเพาะเจาะจงกับ P. ananatis สายพันธุ์ข้าวโพด
การออกแบบไพรเมอร์ที่มีความจําเพาะ กับยีนบริเวณ Ygbk เพื่อใช้ตรวจสอบ P. ananatis สายพันธุ์ข้าวโพดโดยออกแบบจากลําดับนิวคลีโอไทด์ของยีนบริ เวณ Ygbk ของ P. ananatis ไอโซเลต LMG 20103 ได้ คู่ไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อ P. ananatis สายพันธุ์ข้าวโพด คือ YgbK F 5’ TCGTCATCAACACGGATAGC 3’ และ YgbK R 5’ CACCAGTACGGGCAGAGTTT 3’ ซึ่งสามารถเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอของ P. ananatis สายพันธุ์ข้าวโพดได้จำนวน 15 ไอโซเลต ที่ขนาด 596 bp (Fig.2B)ในขณะที่ไม่สามารถเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอของเชื้อ P. ananatis ไอโซเลตยูคาลิปตัส และ Pantoea ananatis pv. ananatis ไอโซเลตสับปะรดจากกลุ่มงานวิจัยอารักขาพืช กรมวิชาการเกษตรได้ ดังนั้นคู่ไพรเมอร์ดังกล่าวจึงเหมาะต่อการนำไปใช้และพัฒนาเป็นไพรเมอร์จำเพาะต่อเชื้อ P. ananatis สายพันธุ์ข้าวโพดเพื่อใช้ในการจำแนกและตรวจสอบต่อไป