อุปกรณ์และวิธีการ1. การเพาะเลี้ยงเช

อุปกรณ์และวิธีการ

1. การเพาะเลี้ยงเชื้อรา
การเพาะเลี้ยงเชื้อราในการทดลองนี้ใช้อาหาร PDA (Potato Dextrose Agar) โดยเชื้อราที่ใช้ในการทดลองนี้ได้จาก stock ห้องปฏิบัติการโรคของแมลง ภาควิชากีฏวิทยาและโรคพืช คณะเกษตรศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่

2. การเตรียมสารสกัดจากพืชวงศ์ Alliaceae โดยประยุกต์จาก ภาณุวรรณ (2547) และ วรารัตน์ และชัยสิทธิ์(2555)
2.1 การเตรียมสารสกัดพืชวงศ์ Alliaceae จำนวน 4 ชนิด ได้แก่ กระเทียม (Allium sativum L.) หอมแดง (Allium ascalonicum L.) หอมหัวใหญ่ (Allium cepa L.) และกุยช่าย (Allium tuberosum Roxb.) ทำการสกัดด้วยวิธีปั่นแช่กรอง อัตราส่วน พืช 100 กรัม ต่อตัวทำละลาย 300 มิลลิลิตร โดยนำพืชแต่ละชนิด ล้างทำความสะอาดตั้งไว้ให้แห้ง จากนั้นนำพืชสมุนไพร แต่ละชนิดมาปั่นให้ละเอียด แช่ในตัวทำละลาย 4 ชนิด คือ dichloromethane, ethyl acetate, ethanol 95% และ methanol โดยเริ่มจาก dichloromethane แช่ทิ้งไว้ 48 ชั่วโมง แล้วกรองด้วยผ้าขาวบาง 2 ชั้น เก็บสารสกัดใส่ขวดสีชา แช่ตู้เย็นเพื่อใช้ทดสอบในขั้นตอนต่อไป
2.2 นำกากตัวอย่างพืชจากข้อ 2.1 มาทำให้แห้งหลังจากกรอง เพื่อให้ตัวทำละลายชนิดแรกระเหยออกไปก่อน เติมตัวทำละลายที่มีความเป็นขั้วเพิ่มขึ้นชนิดที่สอง คือ ethyl acetate ปริมาตร 300 มิลลิลิตร ทำเช่นเดียวกับข้อ 2.1
2.3 เปลี่ยนตัวทำละลายจาก ethyl acetate เป็น ethanol 95% และ methanol ตามลำดับ

3. การทดสอบผลของสารสกัดหยาบจากพืชในการยับยั้งการเจริญของเชื้อราสาเหตุโรคชอล์คบรูด
เทอาหารเลี้ยงเชื้อ PDA ลงในจานเลี้ยงเชื้อขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 9 เซนติเมตร ในปริมาตรจานละ 20-25 มิลลิลิตร ใช้ cork borer ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 2 มิลลิเมตร เจาะปลายเส้นใยของเชื้อราไปวางไว้ตรงจุดกึ่งกลางของจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมไว้ โดยวางให้เส้นใยหงายขึ้น จากนั้นใช้ไมโครปิเปตดูดสารสกัดในปริมาตร 10 ไมโครลิตร หยดลงบนเส้นใยเชื้อราโดยตรง จากนั้นนำไปบ่มไว้ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส โดยใช้แอลกอฮอล์และน้ำกลั่นเป็นกรรมวิธีควบคุม ทำการวัดการเจริญของเส้นใยทุกๆวัน เป็นเวลา 7 วัน และทำการทดลอง 3 ซ้ำในสารสกัดแต่ละชนิด

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 1:

Device and method1. in vitro fungi. Vitro fungi in this experiment used diet PDA (Potato Dextrose Agar) by fungi that are used in this experiment from the stock diseases laboratory of pesticide. Department of Entomology and plant diseases, Faculty of agricultural sciences, Chiang Mai University.2. to prepare a plant extract from the application of the Alliaceae family phanu Wan (2547 (2004)) and Wara jewel victory and rights (2555 (2012))2.1 preparation of extracts of plants such as garlic, type 4 Alliaceae dynasty (Allium sativum L.) shallot (Allium ascalonicum L.) and onion (Allium cepa L.) and Allium Tuberosum (Allium tuberosum Roxb.) how to extract frozen Smoothie 100 g per plant ratio filter solvent 300 ml with each type of plant. Clean and dry the area and then bring each of the herbs come frozen in detail spun solvent ethyl acetate, dichloromethane is a type 4, 95% ethanol and methanol, dichloromethane, starting from 48 hours left to soak with some white fabric laeokrong 2 rack bottle holders, tea extract, colour refrigerator to be used in the next step. 2.2 release sewage plant samples from 2.1. drying after the filter so that the solvent type raekraye first. Fill the solvent polarity is increased, the second type is the ethyl acetate volume 300 ml the same as article 2.1.2.3. the solvent ethyl acetate and methanol ethanol 95% as respectively. 3. testing the effects of crude extracts from plants on the growth inhibition of the fungal disease, "cho comments can swipe.Pour into dish meal PDA fuel feed fuel to the diameter 9 cm in volume 20 per plate-25 ml using a cork borer diameter 2 mm drill at the end of the fibers of the fungi to match the center of the plate meal prepared mould. By putting the fiber facing. Then use the vacuum micro-pet health supplements in volume 10 microliter drips onto the fiber directly to fungi and then taken to the curing temperature of 30 degrees Celsius. By using alcohol and distilled water into the processes that control. To measure the growth of fiber every day for a period of 7 days and 3 trials in each type of extract.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 2:

Materials and methods : 1. Cultured fungi cultured fungi in this study using food PDA (Potato Dextrose Agar) by fungi used in this study was obtained from laboratory stock angiopathy. Department of Entomology and Plant Pathology Contributors University 2. Preparation of plant extracts family Alliaceae by application of Panu Wan (2547) and Vararatana and Chai (2555) 2.1. Preparation of plant extracts family Alliaceae 4 types of garlic (Allium sativum L.), onion (Allium ascalonicum L.) onion (Allium cepa L.) and Kuicheai (Allium tuberosum Roxb.) Were extracted by immersion blender filter ratio. Plants 100 grams per 300 ml of solvent to the plant. Cleaning set to dry. Then the plants Each was thoroughly blended Immersed in a solvent 4 kinds of dichloromethane, ethyl acetate, ethanol 95% by the start of dichloromethane and methanol soak them for 48 hours and then filtered with a white cloth 2 racks extract a brown bottle. Refrigerate for testing in the next step 2.2. The residue dried plant specimens in 2.1 after filtering. The first solvent to evaporate before. Fill solvents with increasing polarity of the second volume of 300 ml of ethyl acetate likes to 2.1 2.3 Substitution of solvent is ethanol 95% ethyl acetate and methanol, respectively 3. To test the effect of the extracts. from plants to inhibit the growth of pathogenic fungi chalk bees PDA agar pour into 9-cm diameter Petri dishes in a volume of 20-25 ml of a 2 mm diameter cork borer penetrate the fibers of the fungus. placed at the center of the prepared agar plates. By placing the fiber side up Then use a micro pipette suction volume extracted in 10 ml drops on mycelial directly. Then incubated at 30 ° C using alcohol and distilled water as a control. Measuring the growth of fiber every day for 7 days and 3 repeated experiments in each extract.

ผลลัพธ์ (อังกฤษ) 3:

Device and method

1. Culturing the fungus
.Culturing the fungus in this experiment using food PDA (Potato Dextrose Agar) by fungi used in this experiment from the stock Diseases Laboratory of insects. Department of Entomology and plant pathology, Faculty of agriculture, University of 2

.Preparation of plant extract family Alliaceae by applying from speech Wan (2547) and sometimes D and chaisit (2555)
2. 1 preparation plant extracts. Alliaceae number 4 types include garlic (Allium sativum L.) shallot (Allium Ascalonicum L.) onion (Allium CEPA L.) and dendrites (Allium tuberosum Roxb.) the pressed filter ratio spinning in plants 100 g solvent 300 ml, the พืชแต่ละ type clean set to dry. The medicinal plants of each type of spin thoroughly soaked in solvent 4 type, is dichloromethaneEthyl acetate ethanol 95% methanol, and starting from the dichloromethane soak it 48 hours, then filtered through a cloth 2 layer. The extract in brown bottles in the fridge is used to test in the next step, the residue 2.2 plant samples from the 2.1 to dry after filtering. For the first kind solvent evaporate away. Fill with increasing solvent polarity type II is ethyl acetate volume 300 ml, as Article 2.1
2.3 solvent shifts from ethyl acetate is ethanol and 95% methanol respectively

3. Test for effect of crude extracts from plants to inhibit the growth of the fungal pathogen chalkbrood
.Pour into the culture medium PDA Petri dish diameter 9 centimeters in volume per plate 20-25 ml, using cork borer. 2 diameter mmBy placing the fiber face up. Then use the micropipette suction extracts in 10 microliter volume Drip on the fiber fungus directly. Then they were incubated at 30 degrees Celsius. Using alcohol and distilled water as a control).For 7 days. The experiment is repeated in each kind 3 extract
.